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動画で学ぶiPS細胞培養

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iPS細胞の検査

未分化性確認試験

未分化性を持つ細胞は、Oct3/4、Nanog、TRA-1-60、SSEA4などの未分化マーカーと呼ばれるタンパク質を発現しています。培養したiPS細胞が未分化性を維持していることを確認するため、上記のような未分化マーカーの発現をqPCR法や免疫染色法により検査します。
また、TRA-1-60, SSEA4などの表面抗原をFCM解析することにより確認することもできます。

❶ 未分化性の確認

未分化マーカー(OCT)
未分化マーカー(TRA-1-60)
未分化マーカー(SSEA4)

三胚葉分化能確認試験

iPS細胞が多分化能を持っていることを確認するため、in vitroで発生過程を再現し「胚様体」という組織を形成させ、その中に三胚葉(内胚葉・中胚葉・外胚葉)の組織が存在することを確認します。外胚葉マーカー(PAX6, MAP2)、中胚葉マーカー(T, MSX1)、内胚葉マーカー(SOX17, AFP)などをqPCRや免疫染色により確認します。

❷ 三胚葉分化能の確認

外胚葉マーカー(TUJ1)
中胚葉マーカー(αSMA)
内胚葉マーカー(SOX17)

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